摘要
目的 探讨积雪草苷对骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化的诱导作用以及潜在机制。方法 使用6个浓度的积雪草苷(0、5、10、20、30、40μmoL/L)作用BMSCs,利用CCK-8与检测细胞增殖率与细胞凋亡率,筛选出积雪草苷对BMSCs最大无毒浓度。将BMSCs分成3组,空白对照组、积雪草苷组与抑制组,空白对照组正常培养,积雪草苷组使用积雪草苷对BMSCs进行诱导成骨分化,抑制组在此基础上加用SB-431542(50 moL/L)处理。诱导12 d后,茜素红染色观察细胞中矿化结节的数量,RT-qPCR检测细胞中碱性磷酸酶(ALP)、骨桥蛋白(OPN)和骨钙素(OCN)基因表达水平,Western blot检测细胞中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad2、p-Smad2、Smad3和p-Smad3蛋白表达水平。结果 20μmoL/L的积雪草苷对BMSCs无明显抑制效果。与空白对照组相比,积雪草苷促进BMSCs钙化结节形成增多,ALP、OPN和OCN基因表达水平升高,TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白表达水平升高(均P<0.05);积雪草苷在TGF-β/Smads通路被抑制的情况下仍然能发挥诱导BMSCs成骨分化作用。结论 积雪草苷具有诱导骨髓间充质干细胞成骨分化的潜力,可能涉及的机制为激活细胞中TGF-β/Smads通路,上调OPN、ALP与OCN基因表达量,帮助骨髓间充质干细胞完成成骨分化。
- 单位