能合成和分泌GABA的永生化星形胶质细胞的构建

作者：笱玉兰; 朱遂强; 陈国华; 罗利俊; 张继龙

来源：卒中与神经疾病, 2007, 14(04): 228-231+234.

DOI：10.3969/j.issn.1007-0478.2007.04.011

• 谷氨酸脱羧酶65亚型
• 氨基丁酸
• 星形胶质细胞

目的构建能合成和分泌GABA的永生化星形胶质细胞。方法在原代培养的大鼠星形胶质细胞内转入猴肾病毒40大T抗原基因(si mian virus40large T antigen gene,SV40Tag)使其永生化(这一部分由同济医院麻醉科田玉科教授实验室完成),并在这些细胞内转入含谷氨酸脱羧酶65亚型(glutamate de-carboxylase65,GAD65)目的基因质粒,对照组转染含β-gal(β-半乳糖苷酶,对照质粒)质粒;应用免疫组化及Western-blot方法检测转染后细胞内GAD65的表达水平;应用毛细管电泳法检测这些细胞内外的氨基丁酸(GABA)含量;用全细胞膜片钳记录构建细胞的GABA电流。结果与转染β-gal的对照组比较,转染GAD65的实验组细胞在具备胶质细胞特性之外,能稳定表达GAD65,细胞内的GAD65含量明显增加;同时细胞内的GABA含量明显高于对照组;实验组细胞外液GABA的浓度明显高于对照组;实验组和对照组均能记录到GABA电流,说明构建细胞功能完善。结论永生化的星形胶质细胞中转入GAD65质粒后具备胶质细胞特性,构建细胞能稳定表达GAD65,并且能合成和分泌GABA。

• 单位
  同济医院; 神经内科; 华中科技大学同济医学院; 武汉市第一医院