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摘要
目的为从中药经方中发现抗癫痫临床候选药物提供理论依据。方法根据中医"君臣佐使,七情和合"的配伍理论,课题组前期对定痫丸进行了拆方研究,定痫丸为中医治疗痫证的重要方剂,载于清代《医学心悟》,用于治疗癫痫的突然发作,拆方后得到了对癫痫具有治疗作用的"远志-天麻","远志-石菖蒲"等药对。方中远志养心安神,天麻熄风止痉,石菖蒲开窍化痰。课题组结合网络药理学、虚拟筛选、亲和超滤、结构修饰、整体动物(MES,PTZ,3-MP)、分子病理(WB,HE,IP)及电生理等手段对上述药对治疗癫痫的机理进行了探讨。结果 (1)物质基础:采用液质联用手段对"远志-天麻"提取物进行成分鉴定,结合文献报道建立"远志-天麻"成分化合物库。在此基础上构建"成分-靶点-通路"网络模型,预测远志与天麻治疗癫痫的有效成分及潜在作用机制。(2)虚拟筛选:通过文献报道的GABA-AT抑制剂为训练集提取其化学特征信息构建了基于配体的HipHop药效团,筛选"远志-天麻"中与药效团匹配的成分,采用分子对接及分子动力学模拟等手段对满足GABA-AT药效团要求的成分与靶标蛋白作用进行了评估,结果表明远志中的细叶远志皂苷A及西伯利亚远志糖A5与天麻中的天麻素等成分可能具有较好的GABA-AT抑制作用。(3)结构修饰:我们先后对远志活性成分TMCA衍生物,石菖蒲活性成分细辛醚衍生物及远志不同部位提取物抗癫痫活性进行系统评价。以对药"远志-天麻"的代谢效应成分TMCA及香兰醇为先导物进行结构修饰,合成TMCA-天麻苷元酯、TMCA-香兰酯、TMCA-乙酰天麻素酯等衍生物衍生物并进行了抗癫痫活性测定,结果表明多种衍生物的保护指数远高于阳性药物卡马西平,其中代表性化合物TMCA-乙酰天麻素酯(ED50:19.5 mg·kg-1)具有进一步开发的潜在价值。(4)分子病理及电生理:初步研究结果表明"远志-天麻"提取物能够对癫痫状态下的焦虑抑郁样行为起到一定治疗作用,调控脑内海马区GABA-AT/GAT-1/GAD 65/GABRA1轴蛋白的表达水平,减少神经元脱失,降低CA1区及CA3区GAT-1,GABA-AT及GABRA1免疫阳性细胞数,而"远志-石菖蒲"活性成分则能够作为乳酸脱氢酶/GABAAR双靶标活性化合物,显著促进氯离子内流,形成神经细胞膜超极化状态。结论基于中药经方定痫丸的药对的再开发研究能够为中药新要的发现及癫痫的中西医结合治疗提供科学依据。
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