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摘要
目的探讨抑制γ突触核蛋白(SNCG)基因表达对结肠癌细胞株生长及侵袭能力的影响。方法针对SNCG基因的mRNA序列(GENBANK:No.NM003087.2),设计合成干扰SNCG基因表达的RNA(siRNA)有效靶序列及其DNA,与慢病毒骨架质粒GV115(hU6-MCS-CMV-EGFP)连接并包装,获得实验组慢病毒LV-SNCG-RNAi-EGFP,并用相同步骤构建阴性对照组慢病毒LVSNCG-NC-EGFP。用两种重组慢病毒分别感染人结肠癌SW1116细胞(实验组:RNAi组,阴性对照组:NC组),荧光显微镜下观察感染后shRNA荧光标签(EGFP)的表达情况;利用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测RNAi组与NC组细胞中SNCG基因表达mRNA的干扰效果;以野生型SW1116细胞为空白对照(野生型组),用Western blot方法检测RNAi组、NC组和野生型组细胞中SNCG基因表达蛋白的干扰效果;CCK-8细胞增殖实验、软琼脂克隆形成实验和Transwell侵袭实验,用于评价RNA干扰SNCG基因表达对RNAi组与NC组细胞的体外生长及侵袭能力的抑制作用。结果成功构建并获得了稳定表达重组慢病毒的SW1116细胞株,表达慢病毒LV-SNCG-RNAiEGFP及LV-SNCG-NC-EGFP滴度均为8×10~8 TU/ml。RNAi组SNCG基因相对表达水平(2~(-△△Ct))为0.114±0.030,低于于对照NC组的SNCG基因相对表达水平(2~(-△△Ct):1.009±0.161),差异有统计学意义(P=0.009);RNAi组SNCG基因干扰效率达到76.8%。RNAi组的SNCG蛋白相对表达量为12.001±2.884,低于NC组(蛋白相对表达量:32.445±4.731)和野生型组(蛋白相对表达量:34.308±6.920),差异有统计学意义(P=0.018,P=0.020)。CCK-8细胞增殖实验显示,干扰SNCG基因表达后,RNAi组细胞的体外增殖能力从48 h开始受到明显抑制,并持续到120 h,与NC组及野生型组差异具有统计学意义(P=0.036)。RNAi组克隆明显偏小,RNAi组平均直径(0.582±0.103)mm,低于NC组[(1.863±0.316)mm]及野生型组[(1.749±0.525)mm],差异具有统计学意义(P=0.003);RNAi组克隆形成率为(17.1±3.5)%,低于NC组[(36.5±4.3)%]及野生型组[(33.8±3.9)%],差异具有统计学意义(P=0.013,P=0.019)。RNAi组的侵袭个数为(37.4±9.3)个,较NC组[(112.3±8.6)个]及野生型组[(100.0±0.0)个]明显减少,差异具有统计学意义(P=0.008,P=0.007)。而NC组及野生型组在细胞增殖能力、克隆形成数量及侵袭能力方面的差异均无统计学意义(P>0.05)。结论 SNCG基因表达在结肠癌细胞的生长和侵袭能力方面具有重要作用。
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单位福建省肿瘤医院
