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摘要
目的构建P16慢病毒载体,为修复坏死心肌干细胞提供理论基础。方法构建pLVX-p16ink4a-ZsGreen、pLVXP16INK4a慢病毒载体,将P16目的基因转导入目标细胞。利用倒置免疫荧光显微镜观察携带绿色荧光蛋白的pLVX-p16ink4a-ZsGreen阳性转导细胞的变化,并通过β-半乳糖苷酶染色鉴定观察pLVX-P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞的变化。利用Western blotting法测定P16目的基因转导成功后蛋白变化水平。结果携带绿色荧光蛋白的pLVX-P16ink4a-ZsGreen阳性转导细胞传代增殖受到抑制,β-半乳糖苷酶染色鉴定观察pLVX-P16INK4a转导阳性细胞即衰老细胞增殖受到抑制,上述两种阳性转导细胞在细胞培养传代过程中被稀释。Western blotting法测定p16INK4a蛋白水平也存在稀释变化。结论构建P16慢病毒载体转导目标细胞传代培养过程中,目的基因P16在细胞传代增殖过程中存在抑制作用,并可导致转导阳性细胞稀释。
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