海藻酸钠-胶原支架材料对人脂肪间充质干细胞增殖与分化的影响

作者：程玮; 韩晓鹏; 牟素丽; 杨帆; 刘利苹

来源：中华口腔医学杂志, 2017, 52(04): 259-264.

• 水凝胶类
• 间质干细胞
• 细胞增殖
• 细胞分化

目的观察人脂肪间充质干细胞(human adipose-derived mesenchymal stem cell,hAMSC)在不同比例海藻酸钠-胶原支架材料表面及内部的增殖、分化情况,探讨适合骨组织工程的材料比例,为骨组织缺损修复提供基础。方法制备含10%海藻酸钠-胶原的支架材料,按海藻酸钠与胶原比例分为A(4:1)、B(2:1)和C组(1:1);各组分别制备冻干薄膜和凝胶小球两种形式;冻干薄膜为冻干后灭菌,将hAMSC覆于薄膜表面;凝胶小球制备时与hAMSC混合。细胞检测试剂盒检测hAMSC在各组冻干薄膜表面的增殖情况;活细胞-死细胞染色检测各组凝胶小球内部hAMSC的细胞存活率;实时荧光定量PCR检测各组冻干薄膜表面和凝胶小球内部hAMSC骨钙蛋白和Runt相关转录因子2(Runt-related transcription factor-2,RUNX2)基因的表达差异;免疫荧光染色观察各组hAMSC骨钙蛋白的表达差异。结果随胶原比例增加,细胞增殖逐步增多,C组细胞增殖量最多。hAMSC在3组凝胶小球内部均可增殖,其中B组细胞存活率[(87.50±2.65)%]最高,与A组[(78.20±2.81)%]及C组[(74.76±1.98)%]相比差异均有统计学意义(P<0.05)。3组冻干薄膜表面hAMSC骨钙蛋白和RUNX2基因表达差异均有统计学意义(P<0.05),其中C组骨钙蛋白和RUNX2基因表达量最高;而B组凝胶小球内部骨钙蛋白基因表达量显著高于其他组(P<0.05);骨钙蛋白免疫荧光染色结果与基因检测结果一致。结论海藻酸钠-胶原支架材料hAMSC增殖、成骨向分化无不利影响,10%水凝胶材料海藻酸钠与胶原比例为2:1时,可利于细胞分化和增殖。

• 单位
  滨州医学院; 第四军医大学; 军事口腔医学国家重点实验室