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摘要
目的:研究扶正解毒方联合5-氟尿嘧啶(5-Fu)对胃癌荷瘤小鼠术后复发转移的抑制作用,并通过肿瘤微环境中CD4+T细胞,CD8+T细胞,调节性T(Treg)细胞含量的改变,内质网应激途径及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)/蛋白激酶B(Akt)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)通路,探讨其可能的分子机制。方法:40只615小鼠随机分为模型组,扶正解毒方(25 g·kg-1)组,5-Fu(25 mg·kg-1)组,联合组(扶正解毒方25 g·kg-1+5-Fu 25 mg·kg-1),每组各10只,将小鼠前胃癌细胞(MFC细胞)接种于左后肢内侧爪垫下,通过手术切除移植瘤建立术后复发模型。苏木素-伊红(HE)染色法观察术后复发胃癌荷瘤小鼠肺转移病理形态的改变;流式细胞术检测复发瘤中CD4+/CD8+T值及脾脏中Treg细胞[CD4+,CD25+,叉头框蛋白P3(FOXP3)+细胞]的含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)及免疫组化法(IHC)检测内质网应激相关蛋白[葡萄糖调节蛋白78(GRP78),肌醇需求酶1α(IRE1α),激活转录因子6(ATF6),蛋白激酶R样内质网激酶(PERK)]含量,以及PI3K/Akt/mTOR通路相关蛋白表达。结果:与模型组比较,联合组复发抑制率明显升高(P<0.05);各治疗组复发瘤重均明显降低(P<0.05);各治疗组肺转移数均降低,转移率均有所降低,联合组肺转移总数最少,转移率最低,但差异无统计学意义;扶正解毒方组、联合组CD4+/CD8+T值明显升高(P<0.05),Treg细胞含量明显降低(P<0.05);5-Fu组Treg细胞含量明显升高(P<0.05)。IHC结果显示,与模型组比较,各治疗组ATF6蛋白表达明显下降(P<0.05,P<0.01),IRE1α表达明显下降(P<0.05),Akt表达显著下降(P<0.01);5-Fu组及联合组mTOR表达明显下降(P<0.05)。Western blot结果显示,与模型组比较5-Fu组GRP78表达明显下降(P<0.05),5-Fu组及联合组PI3K,磷酸化Akt(p-Akt),mTOR表达明显下降(P<0.05)。结论:扶正解毒方联合5-Fu可以抑制荷瘤小鼠术后复发转移,机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR的信号通路,下调内质网应激,改善肿瘤免疫抑制微环境有关。
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单位南京医科大学; 苏州市立医院; 中国中医科学院广安门医院
