猪流行性腹泻病毒S1蛋白IgG抗体间接ELISA检测方法的建立

作者：钱嘉莉; 宋旭; 张雪; 王传红; 徐红; **丹; 王先炜; 范宝超^*; 李彬^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(03): 269-276.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0053

• 猪流行性腹泻病毒
• S1蛋白
• 293F细胞
• 间接ELISA

根据猪流行性腹泻病毒（PEDV）变异株的S1基因序列，与pcDNA3.1载体构建重组表达质粒pcDNA-12S1，利用瞬时转染方法将pcDNA-12S1转染至293F细胞，每隔24 h取样，进行Western-blot检测，确定最佳收样时间，并采用镍离子亲和层析技术进行蛋白纯化。SDS-PAGE和Western-blot结果显示，该S1蛋白的纯度高、免疫原性好。以S1蛋白作为包被抗原，建立并优化了IgG抗体间接ELISA方法。结果显示，S1蛋白的最佳包被浓度为0.25μg/m L；最佳封闭剂和最佳封闭时间为5%脱脂奶粉溶液37℃作用3 h；待检血清和酶标二抗的最佳稀释度分别为1∶100和1∶20 000，最佳孵育时间均为37℃30 min。采用该方法检测猪非典型瘟病毒（APPV）、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDCoV）、猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）和猪轮状病毒（PoRV）的阳性血清，结果均为阴性，表明该方法特异性好；该方法的批内和批间变异系数（CV）均<9%，表明该方法重复性较好；该方法与间接免疫荧光（IFA）相比较，阳性符合率为93.54%，阴性符合率为94.74%，总符合率为94%。上述结果表明，该方法可用于检测临床猪血清中的PEDV抗体，为PEDV的感染与接种疫苗后的免疫保护状态监测提供有效依据。

• 单位
  江苏省农业科学院