柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(EtMIC1)基因的原核表达与重组蛋白的免疫原性分析

作者：张圳; 王松; 孙铭飞; 胡建和; **妮; 朱惠丽

来源：黑龙江畜牧兽医, 2023, (20): 77-82.

DOI：10.13881/j.cnki.hljxmsy.2022.11.0105

• 柔嫩艾美耳球虫
• EtMIC1
• 原核表达
• 免疫原性
• SDS-PAGE分析
• Western-blot鉴定

为了解原核表达柔嫩艾美耳球虫微线蛋白1(Eimeria tenella microneme 1,EtMIC1)重组蛋白的免疫原性，试验以柔嫩艾美耳球虫广东株孢子化卵囊为材料，首先采用PCR技术扩增去除信号肽的EtMIC1基因，将其插入原核表达载体pET-32a(+)中，构建重组原核表达载体，然后将重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1转化至大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中，用IPTG进行诱导表达，最后对重组蛋白进行SDS-PAGE分析和Western-blot鉴定。结果表明：PCR扩增出大小为2 055 bp的去信号肽EtMIC1基因片段，与预期结果一致；构建的重组原核表达载体pET32a(+)-EtMIC1可在大肠杆菌T7pLysY感受态细胞中表达，重组蛋白分子质量大小约为93 ku,主要表达在上清液中，可被自然感染抗柔嫩艾美耳球虫鸡血清和EtMIC1重组蛋白多克隆抗体特异性识别。说明试验成功表达了EtMIC1重组蛋白，原核表达的EtMIC1重组蛋白具有良好的免疫原性。

• 单位
  河南科技学院; 动物科技学院; 广东省农业科学院动物卫生研究所