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摘要
目的:筛选鸟分枝杆菌(MAV)中耐受表面活性物质的基因并探究其相关功能,以认识MAV适应肺部环境的机制。方法:构建MAV基因组文库,采用生物活性水平筛选策略从基因组文库中筛选耐受十二烷基硫酸钠(SDS)的克隆子,运用生物信息学分析该克隆子的完整的开放阅读框架(ORF)及其编码蛋白的二级结构特点。将克隆子的全基因序列与pGEX-4T-3表达质粒连接后转化大肠杆菌,构建过表达目的蛋白的重组菌,然后检测重组菌分别在含SDS、H2O2、NaNO2和GSNO条件下的存活率。结果:成功构建滴度为1.18×104 CFU/mL的MAV基因组文库,并从文库中筛选到一个耐受SDS的基因MAV-4012。生物信息学分析显示,MAV-4012蛋白是一个无信号肽的跨膜蛋白,二级结构以α-螺旋为主。过表达MAV-4012重组菌在2%SDS、5 mmol/L H2O2、20 mmol/L NaNO2和10 mmol/L GSNO体外条件下的存活率均比空载菌显著提高(P<0.05)。结论:MAV-4012是MAV中的一个耐受表面活性物质的基因,其编码的蛋白参与了肺部表面活性物质、活性氧(ROS)及活性氮(RNS)的胁迫应答,是MAV重要的毒力因子。
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