DNA提取方法对桑树内生菌多样性研究的影响

作者：黄雅丽; 马嫚; 张韧; 万幸; 邝枣园

来源：广州中医药大学学报, 2015, 32(04): 729-734.

DOI：10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2015.04.033

• 桑树/分离和提纯
• 内生菌
• DNA提取
• PCR-DGGE

【目的】基于聚合酶链式反应—变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)对桑树根、茎、叶组织内生菌多样性的分析,结合浓度、纯度、PCR扩增性等指标,比较4种DNA提取方法之优劣。【方法】采用常见的DNA提取方法十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法、缓冲液振荡(SPBS)法、液氮研磨(LNG)法和试剂盒(KIT)法提取桑树各组织DNA,从PCR-DGGE多样性等多方面对4种方法进行比较。【结果】对于桑树根和茎,DNA提取浓度最高的方法是LNG法,最低的是SPBS法;桑树叶情况则完全相反。桑树各组织,KIT法获得的DNA纯度均最高。桑树各组织通过16S r DNA PCR-DGGE比较内生细菌多样性,适宜的DNA提取方法是LNG法或CTAB法,不宜采用KIT法提取DNA。内生真菌ITS PCR-DGGE分析结果完全不同,最佳提取方法是KIT法,最不适宜的DNA提取方法因组织不同而异。【结论】对于桑树内生菌研究,最佳的DNA提取方法因组织不同而异,还与研究的内生菌种类有关系。

• 单位
  江西医学高等专科学校; 广州中医药大学; 基础医学院