尼帕病毒截短G蛋白的原核表达及间接ELISA检测方法的建立

作者：王琼; 莫若; 张颖; 冯娜; 闫飞虎; 王铁成; 王开^*; 赵永坤^*

来源：中国兽医科学, 2023, 53(10): 1223-1231.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2023.0180

• 尼帕病毒
• 间接ELISA
• 原核表达
• 截短G蛋白

以截短的尼帕病毒（NiV）G基因原核表达产物为抗原建立检测尼帕病毒抗体的间接ELISA检测方法。对编码尼帕病毒G蛋白基因的部分序列进行扩增，将扩增获得的目的片段克隆至原核表达载体pET-30a（+），并转化至大肠杆菌BL21(DE3)。菌落PCR鉴定后，在最佳诱导条件下表达目的蛋白。用Ni-NTA柱纯化截短的G蛋白，并进行SDS-PAGE和Western-blot鉴定。以纯化的蛋白为抗原建立尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法，并对该方法的特异性、灵敏性、稳定性进行验证。结果显示：成功构建重组质粒pET-30a(+)-NiV-G；表达的尼帕病毒截短G蛋白分子质量为50 ku，与预期值相符；截短的G蛋白能被His-tag抗体、抗尼帕病毒G蛋白粗提IgG识别。以该蛋白为包被抗原建立的间接ELISA检测方法检测已知阳性血清尼帕病毒抗体效价为1︰20 480，裂谷热病毒、西尼罗病毒及克里米亚-刚果出血热病毒阳性马血清的检测结果均为阴性，且该方法批内、批间试验变异系数均小于10%。结果表明，成功构建了重组质粒pET-30a(+)-NiV-G，并诱导表达尼帕病毒截短G蛋白。以该蛋白建立的尼帕病毒抗体间接ELISA检测方法具有良好的特异性、灵敏性、稳定性，可用于尼帕病毒疫苗免疫效果的评价、尼帕病毒病的监测及尼帕病毒抗体检测试剂盒的研发。

• 单位
  吉林农业大学; 中国农业科学院; 东北林业大学