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摘要
目的：探究酰基甘油激酶（AGK）在血小板活化中的作用及可能的调控机制。方法：分别提取野生型小鼠（WT）和AgkG126E点突变（AGK激酶活性丧失）小鼠（PM）的血小板。将等体积、等浓度的WT或PM小鼠的血小板放入聚集仪，分别利用3种刺激剂（α-Thrombin、ADP、U46619）刺激，检测每种刺激剂作用下相应的血小板聚集水平；每管聚集曲线达到最大稳定值后，加入等体积的ATP荧光检测剂，检测相应血小板活化过程中释放的ATP水平。分别在静息态WT或PM小鼠血小板（不加α-Thrombin刺激）、活化态WT或PM小鼠血小板（加入α-Thrombin刺激）中加入等量荧光偶联的纤维蛋白原（Fg），利用流式细胞仪检测血小板的Fg结合水平。Western blot法分别检测静息态（不加刺激剂）和活化态（加入α-Thrombin、ADP、U46619刺激）WT或PM小鼠血小板中关键信号通路蛋白的磷酸化水平。结果：在刺激剂作用于血小板后，PM小鼠血小板的聚集程度、ATP释放水平及Fg结合能力均明显低于WT小鼠的血小板（P均<0.01）。与WT小鼠相比，PM小鼠的血小板在活化过程中张力蛋白同源性磷酸酶（PTEN）、磷脂酰肌醇3-激酶（PI3K）、蛋白激酶B(Akt-Thr308)和糖原合成激酶3β(Gsk3β-Ser9)的磷酸化水平均明显降低（P均<0.01）。结论：酰基甘油激酶可能通过影响PTEN/PI3K/Akt/Gsk3β信号通路，参与调控血小板的活化。
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