少孢节丛孢菌Aoz1基因的生物信息学分析及原核表达条件的优化

作者：尹相吉; 王新芳; 聂福贵; 郭少平; 钱英红; 陈湘江; 乔一丹; 李泽浩; 符江涛; 杨晓野; 王瑞^*

来源：中国兽医科学, 2019, 49(03): 333-340.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2019.0047

• 捕食线虫性真菌
• 少孢节丛孢菌
• 丝氨酸蛋白酶
• Aoz1基因

为获悉少孢节丛孢菌内蒙古株Aoz1基因的详细信息,以研究捕食线虫性真菌对线虫的作用机制,本试验以捕食线虫性真菌的代表种——少孢节丛孢菌内蒙古株为研究对象,首先扩增其胞外丝氨酸蛋白酶的基因编码序列,并进行生物信息学分析,然后将其构建至原核表达载体pET-32a中,再转化至Transetta(DE3)表达感受态细胞中,进行表达条件的优化以及表达产物的纯化。结果表明,少孢节丛孢菌内蒙古株丝氨酸蛋白酶Aoz1基因与已发表的丝氨酸蛋白酶Aoz1基因的同源性为99%,其蛋白具备螺旋结构;在原核系统中进行表达,其最适IPTG诱导浓度为1.5 mmol/L,最佳诱导时间为8 h,确定了重组蛋白的最佳表达条件,并获得了重组蛋白。对该酶基因的分析,为后续有关蛋白酶和捕食线虫性真菌杀灭寄生性线虫机理方面的研究提供了参考资料。

• 单位
  内蒙古农业大学; 农业部; 内蒙古自治区农牧业科学院