加热洗脱硝酸纤维膜上保存的尿蛋白质

作者：秦伟伟; 高友鹤

来源：生物工程学报, 2015, 31(09): 1387-1392.

DOI：10.13345/j.cjb.150039

• 尿蛋白质保存
• 硝酸纤维膜
• 蛋白质组学
• 生物样本保存

用膜保存尿蛋白质对于生物标志物的研发意义重大,从保存尿蛋白质的硝酸纤维膜上洗脱蛋白质的有效性,决定着保存方法被接受的程度和应用的范围。加热洗脱蛋白质的方法,通过提高硝酸纤维膜溶解时的温度等方式;并运用SDS-PAGE和LC-MS/MS分析加热洗脱方法所制备的尿蛋白质样品,将其与强烈涡旋洗脱方法和直接丙酮沉淀方法所制备的尿蛋白质样品比较。结果显示,加热洗脱方法比强烈涡旋洗脱方法获得更多的蛋白质(P<0.05),且蛋白质无降解;加热洗脱方法和直接丙酮沉淀方法制备的蛋白质样品,质谱所鉴定到蛋白质重叠率无明显差异(分别是92.6%、96.8%),蛋白质丰度CV值<20%的蛋白质占总蛋白质的比例均很高(分别是85.2%、94.4%)。加热洗脱法具有很好的技术重复性,操作更加高效、简单,有利于用膜保存尿蛋白质方法的推广应用。

• 单位
  生命科学学院; 医学分子生物学国家重点实验室; 北京师范大学; 中国医学科学院基础医学研究所