X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析及其致DNA双链断裂的动态变化

作者：董隽; 王成涛; 张纯; 任玉峰; 欧阳斌; 张天; 王振宇; 文碧秀^*

来源：中华放射肿瘤学杂志, 2018, 27(03): 303-308.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1004-4221.2018.03.015

• 非同源末端连接
• DNA依赖蛋白激酶催化亚基
• γH2AX焦点
• SUNE-1细胞系

目的比较DNA依赖蛋白激酶催化亚基(DNA-PKcs+/+)和DNA-PKcs-/-小鼠胚胎成纤维细胞(MEF) X射线诱导γH2AX焦点形成的定量分析,并对鼻咽癌SUNE-1细胞进行X射线致DNA DSB动态变化。方法采用蛋白印迹检测DNA-PKcs蛋白表达情况,细胞免疫荧光检测X射线5 Gy诱导的γH2AX焦点形成,通过ImageJ软件分析γH2AX焦点形成数量的差异。结果 DNA-PKcs在DNA-PKcs-/-和DNA-PKcs+/+ MEF细胞中分别表达缺失和正常。应用γH2AX焦点/细胞和γH2AX焦点/mm2分析方法动态分析X射线诱导的DNA-PKcs+/+、DNA-PKcs-/-MEF细胞和SUNE-1细胞DSB形成的总体趋势一致;照后0.5～1.0 h大量γH2AX焦点形成,DNA-PKcs+/+ MEF细胞于照后6.0 h完成修复,DNA-PKcs-/-MEF和SUNE-1细胞X射线后于照后24.0 h完成修复。γH2AX焦点/细胞的峰值出现在照后1.0 h,γH2AX焦点/mm2的峰值则出现在照后0.5 h。对于DNA-PKcs+/+和DNA-PKcs-/-MEF细胞,γH2AX焦点/细胞在照后0.5、1.0、3.0、6.0、12.0 h的不同,而γH2AX焦点/mm2在照后3.0、6.0、12.0 h不同。结论利用细胞免疫荧光动态检测照后致γH2AX焦点/细胞或γH2AX焦点/mm2的分析方法为动态定量研究DSB损伤及修复提供了新的思路。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 东莞市人民医院