环状RNA circRtn4对小鼠成肌细胞增殖和分化功能的影响

作者：王海霞; 陈小帆; 张伟^*

来源：中华实用诊断与治疗杂志, 2019, 33(10): 953-957.

DOI：10.13507/j.issn.1674-3474.2019.10.005

• circRtn4
• 成肌细胞
• 增殖
• 分化
• 小鼠

目的探讨circRtn4在小鼠成肌细胞C2C12细胞中的表达情况及其对成肌细胞增殖和分化功能的影响。方法对数生长期小鼠成肌细胞C2C12细胞,采用PCR检测C2C12细胞中circRtn4表达情况,采用实时荧光定量PCR法检测分化前及分化第1、2、3、4天circRtn4相对表达量,采用核质分离实验确定细胞内定位。对数生长期C2C12细胞分为沉默组和对照组,分别转染特异性靶向circRtn4的siRNA和阴性对照siRNA,采用实时荧光定量PCR检测2组细胞circRtn4沉默效率和脱靶情况,采用CCK-8法检测培养前及培养第1、2、3、4天2组细胞增殖率,采用免疫荧光法和Western blot法检测2组分化第2天MYOG蛋白和分化第4天MHC蛋白表达情况。结果 C2C12细胞分化第3天circRtn4相对表达量(3.72±0.32)高于分化前(1.00±0.01)及分化第1天(0.76±0.03)、第2天(1.21±0.12)和第4天(2.51±0.33)(P<0.05),分化第4天高于分化前及分化第1、2天(P<0.05),分化第1天低于分化前(P<0.05);circRtn4在C2C12细胞质中占67.93%,细胞核中占32.07%;沉默组circRtn4相对表达量(0.03±0.02)低于对照组(0.97±0.03)(P<0.05),Rtn4 mRNA相对表达量(1.11±0.11)与对照组(0.99±0.03)比较差异无统计学意义(P>0.05);培养前及培养第1、2、3、4天,2组细胞增殖率比较差异均无统计学意义(P>0.05);沉默组分化第2天表达MYOG蛋白的细胞数减少,分化第4天表达MHC蛋白的细胞肌纤维化不明显,细胞极化和融合不明显;沉默组分化第2天MYOG蛋白(0.68±0.05)和分化第4天MHC蛋白(0.75±0.06)相对表达量明显低于对照组(1.00±0.09、1.00±0.13)(P<0.05)。结论 circRtn4在成肌细胞C2C12细胞中表达,在成肌细胞分化中后期表达量明显增加;circRtn4表达被沉默后,C2C12细胞增殖无明显变化,但其分化受到抑制。

• 单位
  深圳北京大学香港科技大学医学中心