miR-409-3p在肝癌HepG2细胞中的表达及其在细胞增殖中的作用机制

作者：王长青; 陈玲; 徐萍; 朱晓娟; 刘政^*

来源：临床肝胆病杂志, 2023, 39(08): 1895-1902.

DOI：10.3969/j.issn.1001-5256.2023.08.019

• 癌,肝细胞
• 微RNAs
• 原癌基因蛋白质c-met
• 细胞增殖

目的 本研究旨在明确miR-409-3p在肝癌细胞系中的表达及其意义，并探讨可能的分子机制。方法 利用实时荧光定量PCR的方法检测miR-409-3p在正常肝细胞LO2,以及HepG2、BEL-7402、SMMC-7721、MHCC-97H四种肝癌细胞中的表达差异。阳离子脂质体法将miR-409-3p mimics及microRNA mimics control瞬时转染至肝癌细胞株HepG2中，利用CCK8法、平板克隆、流式细胞术检测miR-409-3p对体外癌细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响。Western Blot检测过表达miR-409-3p的HepG2细胞中c-Met蛋白的表达变化，荧光素酶报告系统鉴定靶向关系。计量资料两组间比较采用成组t检验，多组间比较采用单因素方差分析，进一步两两比较采用SNK法。结果 基于TCGA肝癌microRNA表达谱数据，肝癌组织中miR-409-3p的表达水平显著低于癌旁组织(t=7.752,P<0.05)。与在LO2中的表达水平相比，miR-409-3p在HepG2、SMMC-7721、MHCC-97H、BEL-7402中的表达水平均明显降低(F=31.043,P<0.05)。与miR-con组相比，转染miR-409-3p mimics后的HepG2细胞中miR-409-3p的表达水平上升(t=-8.836,P<0.05),说明干扰有效。CCK8实验结果显示，与miR-con组相比，转染miR-409-3p mimics后的HepG2细胞增殖能力在48、72、96 h明显减弱，差异均具有统计学意义(t值分别为2.876、3.359、3.707,P值均<0.05)。平板克隆形成实验显示，miR-409-3p mimics组的细胞克隆形成率明显低于miR-con组(t=2.846,P=0.047)。流式细胞术结果显示，与miR-con组相比，过表达miR-409-3p后导致HepG2细胞G2期细胞数增多，差异具有统计学意义(t=-3.763,P<0.05);而凋亡率无明显统计学差异(t=0.714,P=0.515)。荧光素酶报告系统鉴定结果显示c-Met为miR-409-3p的靶基因(t=4.970,P=0.007)。与miR-con组相比，转染miR-409-3p mimics的HepG2细胞中，c-Met蛋白表达水平下降(t=-8.509,P=0.001)。结论 miR-409-3p通过抑制c-Met蛋白表达，进而调控下游信号通路引起细胞周期G2期阻滞，从而抑制肝癌HepG2细胞的增殖。

• 单位
  南京医科大学第二附属医院; 盐城市第一人民医院