半枝莲提取物对肝癌HuH-7细胞自噬的影响及其作用机制

作者：王娟霞^*; 鲁佳敏; 吴瑞; 郭佳敏; 门碧莹; 黄子龙

来源：中国生物制品学杂志, 2022, 35(12): 1465-1470.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.003775

• 半枝莲提取物
• 自噬
• 肝癌
• PI3K/AKT/mTOR信号通路

目的 探讨半枝莲提取物对肝癌HuH-7细胞自噬的影响，并分析自噬在半枝莲提取物调节HuH-7细胞生长抑制中的作用机制。方法 分别用100、200、500、1 000和1 500μg/mL浓度的半枝莲提取物以及500μg/mL半枝莲提取物+5 mol/L 3-Methyladenine(3-MA)处理HuH-7细胞24 h，设不加半枝莲提取物对照组。CCK-8试验检测各组细胞活力，确定最适半枝莲提取物处理浓度，并检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞活力的影响；激光共聚焦试验和Western blot法检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞自噬的影响；流式细胞术检测半枝莲提取物及3-MA逆转半枝莲提取物对HuH-7细胞凋亡的影响；Western blot法检测半枝莲提取物对PI3K/AKT/mTOR信号通路的影响。结果 500μg/mL半枝莲提取物抑制HuH-7细胞活性40%左右，作用浓度适中，选择该浓度处理HuH-7细胞。与对照组相比，500μg/mL半枝莲提取物可明显诱导LC3B斑点的形成（F=2.597,P <0.01）;LC3B-Ⅱ蛋白表达明显升高（F=2.127,P <0.01），而P62蛋白表达明显降低（F=0.589,P <0.01）。与500μg/mL半枝莲提取物组相比，500μg/mL半枝莲提取物+5 mol/L 3-MA细胞LC3B斑点形成明显降低（F=1.180,P <0.01）;LC3B-Ⅱ蛋白表达明显降低（F=2.315,P <0.01），而P62蛋白表达明显升高（F=0.153,P <0.01）；细胞活性明显恢复（F=1.462,P <0.01），且细胞凋亡率明显降低（F=0.119,P <0.01）。与对照组相比，500μg/mL半枝莲提取物可明显抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路的活性。结论 半枝莲提取物可通过激活自噬抑制肝癌HuH-7细胞生长，其机制可能与对PI3K/AKT/mTOR信号通路的抑制相关。

• 单位
  兰州大学第二医院; 兰州大学; 第二临床医学院