小鼠骨髓来源调节性树突状细胞的体外培养及鉴定

作者：谷红红; 黄一虹; 武家庆; 刘苍春; 曾令宇; 李德鹏; 李振宇; 徐开林

来源：国际输血及血液学杂志, 2014, 37(01): 5-10.

DOI：10.3760/cma.j.issn.1673-419X.2014.01.002

• 树突状细胞,调节性
• 免疫耐受
• 小鼠
• 细胞因子
• 细胞培养

目的体外诱导培养小鼠骨髓来源调节性树突状细胞(DCreg),并从其细胞形态、免疫表型、功能特征等对其进行鉴定。方法无菌条件下取C57BL/6小鼠的骨髓单个核细胞,按体外诱导培养的培养体系不同,将其分为3组:未成熟DC(imDC)组(n=16),用含重组鼠粒-巨噬细胞集落刺激因子(rmGMCSF)20 ng/mL,重组鼠白细胞介素-4(rmIL-4)10 ng/mL的RPMI 1640培养基诱导培养7 d;②成熟DC(mDC)组,用含rmGM-CSF 20 ng/mL,rmIL-4 10 ng/mL的RPMI 1640培养基培养6 d,予细菌脂多糖(LPS)刺激24 h,使其成熟;③DCreg组:用含rmGM-CSF 20 ng/mL,IL-10 20 ng/mL,转化生长因子-β1(TGF-β1)20 ng/mL的RPMI 1640培养基培养7 d,LPS刺激24 h使其成熟(所有实验动物处置符合动物伦理学标准)。显微镜下观察DC的形态、超微结构,流式细胞仪检测其免疫表型,CCK-8法检测刺激淋巴细胞增殖活性,趋化实验检测细胞迁移能力。结果①利用不同细胞因子组合的培养体系能诱导生成具有典型树枝状突起的DC细胞,透射电镜下观察到mDC放射状突起多而密集,细胞表面褶皱多,imDC、DCreg放射状突起较稀疏,细胞表面褶皱减少;②mDC高表达CD80、CD86、CD11c和IA/IE分子,imDC低表达CD80、CD86、IA/IE分子,高表达CD11c,DCreg高表达CD45RB,低表达CD11c、CD80、CD86;③DCreg组和imDC组体外刺激异基因淋巴细胞增殖能力较弱。3组DC刺激异基因淋巴细胞增殖率比较,差异有统计学意义(F=163.24,P<0.01);④DCreg的趋化迁移能力最强。3组迁移率相比,差异有统计学意义(F=560.644,P<0.01)。结论应用细胞因子GM-CSF,IL-10和TGF-β1能成功诱导培养出小鼠骨髓源性CD11clowCD45RBhigh调节性DC,其功能特征为移植免疫耐受的进一步研究奠定实验基础。

• 单位
  徐州医学院附属医院; 徐州医学院附属第三医院; 陕西省妇幼保健院