人血清中cTnI的化学发光酶免疫分析研究──实验条件的优化

作者：何农跃; 郭会时; 顾春荣; 杨笛; 张寄南

来源：高等学校化学学报, 2007, (02): 242-245.

DOI：10.3321/j.issn:0251-0790.2007.02.010

• 化学发光免疫分析
• 急性心肌梗死
• AMPPD
• 心肌肌钙蛋白(cTnI)

采用高效化学发光试剂3-(2′-螺旋金刚烷)-4-甲氧基-4-(3″-羟基)苯-1,2-二氧杂环丁烷磷酸(AMPPD)作为检测底物,并将传统的ELISA两步双抗夹心法改为一步法,得到了高灵敏测定人血清中心肌肌钙蛋白I(cTnI)的化学发光酶免疫分析优化条件.采用单因素变化法和方阵滴定法得到的最佳实验条件为:捕获抗体包被浓度为10.0μg/mL,以pH=7.0的PBS作为免疫反应缓冲底液,以含质量分数为1.0%的BSApH=9.6的碳酸盐溶液缓冲液,于4℃封闭过夜,生物素-检测抗体(Biotin-IgG2)以及碱性磷酸酶-亲和素(ALP-Avidin)结合物均采用1∶2000稀释度,免疫反应条件为37℃,孵育时间60 min,以去离子水作为洗涤剂,以1∶100稀释的AMPPD作为发光反应底物,发光反应时间10 min(37℃).检出限为0.02 ng/mL,比现行ELISA法灵敏度提高一个数量级;测定周期约75 min,比两步法ELISA快得多;线性范围(0.04~36.20 ng/mL)比ELISA法扩宽了两个数量级;加标回收率97.5%~102.8%,对标准样品的测定结果与用ELISA法的测定结果吻合;重复性好,3个样品批内变异系数均小于8.5%(n=12).

• 单位
  第一临床医学院; 东南大学; 南京医科大学; 生物电子学国家重点实验室