CHIR99021对小鼠胚胎干细胞心肌细胞分化的双重作用

作者：杨谋广; 邹传德; 王爱玲

来源：安徽医科大学学报, 2016, 51(12): 1733-1737.

DOI：10.19405/j.cnki.issn1000-1492.2016.12.004

• 胚胎干细胞
• 心肌细胞
• 分化
• GSK3β
• CHIR99021

目的研究CHIR99021在小鼠胚胎干细胞(m ESCs)分化为心肌细胞的作用。方法运用经典的悬滴培养法促进m ESCs形成拟胚体(EBs)。在不同分化时间段加入糖原合成激酶-3β(GSK-3β)抑制剂CHIR99021,诱导m ESCs向心肌细胞分化,相差显微镜在不同时间点观察不同组EBs搏动百分率。RT-PCR法检测心肌特异性转录因子Nkx2.5、α-肌球蛋白重链(α-MHC)基因表达水平的变化。Western blot法和免疫荧光染色法检测心肌特异性蛋白c Tn T的表达。实验时将不加入CHIR99021命名为对照组,分化第25天和第610天加入CHIR99021分别命名为25 d组和610 d组。结果通过悬滴培养法能够形成EBs,且形成的EBs能够出现自发性搏动并有c Tn T表达。在诱导分化的过程中,第25天加入CHIR99021的25 d组的搏动EBs百分率比对照组更高,Nkx2.5、α-MHC基因表达的水平也比对照组高;610 d组的结果跟25 d组相反。各组中都可通过Western blot和免疫荧光染色法检测到c Tn T的表达,但25d组的c Tn T的表达量高于对照组,610 d组的c Tn T的表达量低于对照组。结论GSK-3β抑制剂CHIR99021对m ESCs心肌细胞分化具有双重作用,即分化前期(25 d)促进分化,可获得更高的分化率,分化后期(610 d)结果相反。

• 单位
  安徽医科大学第一附属医院