摘要
本文旨在探究G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖,雌激素(E2)和孕酮(P4)分泌,以及类固醇分泌相关基因和细胞凋亡基因表达的影响。采集小尾寒羊新鲜卵巢,用割吸法收集中小卵泡的卵泡液,离心分离颗粒细胞,分为试验组和对照组,试验组采用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除G0S2基因,获得重组表达载体PX458-sgRNA-G0S2转染至颗粒细胞;对照组转染PX458质粒至颗粒细胞。检测颗粒细胞活力和凋亡情况,以及E2和P4水平及相关基因的表达量。结果表明,试验组G0S2 mRNA的表达量及蛋白水平极显著低于对照组(P<0.01),分别降低了66%和70%,G0S2敲除成功。试验组颗粒细胞的增殖活力显著高于对照组(P<0.05),细胞凋亡率极显著下降56%(P<0.01)。试验组E2水平显著高于对照组(P<0.05),P4水平显著低于对照组(P<0.05)。试验组颗粒细胞中StAR、CYP11、3β-HSD的表达量极显著低于对照组(P<0.01),CYP19的表达量极显著高于对照组(P<0.01)。与对照组相比,试验组颗粒细胞中Caspase3和Bax的表达极显著下调(P<0.01),Bcl-2的表达极显著上调(P<0.01)。上述结果表明,敲除G0S2基因能促进在绵羊卵巢颗粒细胞的增殖,抑制其凋亡,通过下调StAR、CYP11、3β-HSD,上调CYP19的表达影响E2和P4的分泌。
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单位动物科技学院; 河北农业大学