敲除G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖、类固醇激素及相关基因表达的影响

作者：马钰静; 段春辉; 贺名扬; 张英杰; 杨若晨; 王泳; 刘月琴^*

来源：生物技术通报, 2023, 39(06): 325-334.

DOI：10.13560/j.cnki.biotech.bull.1985.2022-1398

• G0S2
• 绵羊
• 颗粒细胞
• 增殖
• 凋亡
• 类固醇激素

本文旨在探究G0S2基因对绵羊卵巢颗粒细胞增殖，雌激素（E2）和孕酮（P4）分泌，以及类固醇分泌相关基因和细胞凋亡基因表达的影响。采集小尾寒羊新鲜卵巢，用割吸法收集中小卵泡的卵泡液，离心分离颗粒细胞，分为试验组和对照组，试验组采用CRISPR-Cas9基因编辑技术敲除G0S2基因，获得重组表达载体PX458-sgRNA-G0S2转染至颗粒细胞；对照组转染PX458质粒至颗粒细胞。检测颗粒细胞活力和凋亡情况，以及E2和P4水平及相关基因的表达量。结果表明，试验组G0S2 mRNA的表达量及蛋白水平极显著低于对照组（P<0.01），分别降低了66%和70%,G0S2敲除成功。试验组颗粒细胞的增殖活力显著高于对照组（P<0.05），细胞凋亡率极显著下降56%(P<0.01)。试验组E2水平显著高于对照组（P<0.05）,P4水平显著低于对照组（P<0.05）。试验组颗粒细胞中StAR、CYP11、3β-HSD的表达量极显著低于对照组（P<0.01）,CYP19的表达量极显著高于对照组（P<0.01）。与对照组相比，试验组颗粒细胞中Caspase3和Bax的表达极显著下调（P<0.01）,Bcl-2的表达极显著上调（P<0.01）。上述结果表明，敲除G0S2基因能促进在绵羊卵巢颗粒细胞的增殖，抑制其凋亡，通过下调StAR、CYP11、3β-HSD，上调CYP19的表达影响E2和P4的分泌。

• 单位
  动物科技学院; 河北农业大学