蓝舌病毒VP5蛋白抗体的制备及鉴定

作者：康棣; 独军政; 高闪电; 田占成; Darien Kheder ALI MOHAMED; 郭艳妮; 刘光远; 罗建勋; 殷宏

来源：中国兽医科学, 2018, 48(06): 671-677.

DOI：10.16656/j.issn.1673-4696.2018.0123

• 蓝舌病毒
• VP5基因
• 原核表达
• 多克隆抗体
• 鉴定

本研究参考GenBank中蓝舌病毒16型(BTV-16)标准株RSAvvvv的序列,首先人工合成编码BTV-16 VP5蛋白的S6全长基因,并克隆于pUC-57载体。设计表达引物,利用PCR方法扩增N末端缺少编码第141位氨基酸的截短基因VP5Δ41aa,将其亚克隆到表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-VP5Δ41aa。将表达质粒转化大肠杆菌BL21(DE3)后,利用IPTG进行诱导表达,SDS-PAGE结果显示,重组蛋白VP5Δ41aa在大肠杆菌中大量表达。利用组氨酸标签纯化树脂获得了高纯度的VP5Δ41aa蛋白,用其3次免疫新西兰大白兔制备相应的抗血清,Western-blot检测显示,抗血清不仅可与重组表达的VP5Δ41aa蛋白反应,而且可与BTV感染细胞中的VP5蛋白反应。免疫荧光试验表明,该抗体也可与BTV感染C6/36细胞中具有天然构象的VP5蛋白反应。上述结果表明,本试验制备的VP5抗体将为深入研究VP5蛋白的生物学功能奠定基础。

• 单位
  中国农业科学院兰州兽医研究所; 江苏省动物重要疫病与人兽共患病防控协同创新中心; 家畜疫病病原生物学国家重点实验室