Tyrobp基因参与抽动障碍模型小鼠神经炎性反应及相关机制

作者：肖向荣; 孙冉^*; 杨欣雨; 李若林; 郝延磊

来源：中华行为医学与脑科学杂志, 2022, 31(12).

• 抽动秽语综合征
• 神经炎性反应
• Tyrobp基因
• Toll样受体4
• 小鼠

目的探讨Tyrobp基因参与抽动障碍模型小鼠神经炎性反应及相关作用机制。方法 6周龄C57BL/6J和Tyrobp-/-雄性小鼠各20只, 按照随机数字表法分为4组:野生型对照组(WT+NS组)、Tyrobp基因敲除对照组(Tyrobp-/-+NS组)、野生型模型组(WT+IDPN组)和Tyrobp基因敲除模型组(Tyrobp-/-+IDPN组)。WT+IDPN组和Tyrobp-/-+IDPN组小鼠连续7 d按150 mg/(kg·d)的剂量腹腔注射亚氨基二丙腈(3, 3-iminodipropionitrile, IDPN)以建立抽动障碍小鼠模型, WT+NS组和Tyrobp-/-+NS组小鼠腹腔注射等量生理盐水。造模结束后, 对小鼠的刻板行为进行评估。采用Western blot检测大脑纹状体组织的酪氨酸激酶结合蛋白(tyrosine kinase binding protein, Tyrobp)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-1β(IL-1β)、Toll样受体4 (Toll-like receptor, TLR4)、髓样分化因子88 (myeloid differentiation factor 88, MyD88)、磷酸化的核转录因子-κB (phospho-nuclear factor kappa B, p-NF-κB) p65、磷酸化的核因子-κB抑制蛋白α (phospho-inhibitor of NF-κB alpha, p-IκBα)的蛋白表达情况。采用免疫荧光染色观察脑组织小胶质细胞激活情况。采用GraphPad Prism 8.0软件对所得数据进行统计分析, 两组数据比较采用t检验;多个样本均数比较采用单因素方差分析, 进一步两两比较采用LSD检验。结果刻板行为评估显示, 四组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均差异有统计学意义(F=270.9, 379.7, 均P<0.01)。WT+IDPN组小鼠的运动刻板行为和分类刻板行为评分均高于Tyrobp-/-+IDPN组[运动刻板行为:(3.23±0.26)分, (2.13±0.21)分, t=9.02, P<0.05;分类刻板行为:(45.80±4.29)分, (26.60±3.48)分, t=12.00, P<0.05]。Western blot结果显示, 各组小鼠纹状体TNF-α、IL-6、IL-1β、TLR4、Myd88、p-NF-κB p65、p-IκBα蛋白表达水平差异有统计学意义(F=29.07, 23.09, 39.36, 57.6, 52.55, 15.50, 40.48, 均P<0.05)。WT+IDPN组蛋白水平高于WT+NS组(t=8.31, 7.37, 8.13, 11.43, 10.47, 6.05, 9.96, 均P<0.05), Tyrobp-/-+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp-/-+NS组(t=3.60, 3.00, 5.84, 4.81, 3.59, 2.26, 4.68, 均P<0.05), WT+IDPN组蛋白水平高于Tyrobp-/-+IDPN组(t=3.97, 3.93, 4.14, 6.40, 7.63, 3.45, 3.03, 均P<0.05)。免疫荧光显示, WT+IDPN组和Tyrobp-/-+IDPN组小鼠纹状体区小胶质细胞胞体增大, 小胶质细胞呈激活状态, WT+IDPN组较Tyrobp-/-+IDPN组小鼠小胶质细胞激活形态更明显。结论 Tyrobp可能通过TLR4/Myd88/NF-κB信号通路参与神经炎性反应介导的抽动秽语综合征的发病机制。

• 单位
  神经内科; 山东大学; 济宁医学院附属医院