三七PnMYB1R1基因的克隆、亚细胞定位与不同胁迫下的表达分析

作者：石玥; 满金辉; 江伟业; 张靖晗; 张志飞; 尹光耀; 王馨; 黄钰莹; 张媛; 王晓晖^*; 魏胜利^*

来源：药学学报, 2022, 57(05): 1506-1515.

DOI：10.16438/j.0513-4870.2021-1617

• 三七
• PnMYB1R1
• 原核表达
• 亚细胞定位
• 转录活性
• 表达分析

MYB转录因子是植物中最大的转录因子家族之一,在植物信号转导、生长发育和植物防御反应中起到重要作用。本研究以三七(Panax notoginseng)为材料,设计特异引物,克隆了三七中1R-MYB转录因子PnMYB1R1基因,并进行氨基酸序列分析、原核表达和纯化、亚细胞定位、转录活性分析、组织特异性分析及非生物胁迫下的诱导表达分析。PnMYB1R1基因开放阅读框(ORF)长738 bp,编码245个氨基酸,蛋白分子质量27.0 kD。序列分析及系统进化树结果表明PnMYB1R1包含1个保守的R3结构域,属于1R-MYB型转录因子中的TRF-like类蛋白。构建原核表达载体pET28a-PnMYB1R1并在大肠杆菌BL21 (DE3)菌株中成功表达PnMYB1R1重组蛋白,纯化得到可溶性重组蛋白。亚细胞定位实验结果表明PnMYB1R1定位于植物细胞的细胞核中。转录活性分析显示PnMYB1R1转录因子具有转录激活活性。实时荧光定量PCR结果表明PnMYB1R1基因在三七主根中表达量最高,茎、叶次之,须根中表达量最低。盐、低温及干旱胁迫均能够影响主根、须根、茎、叶中PnMYB1R1基因的表达水平,其中盐胁迫能够显著提高主根、须根、茎和叶中PnMYB1R1基因的表达水平。本研究为进一步揭示1R-MYB转录因子在三七中防御反应中作用奠定基础。

• 单位
  北京中医药大学; 中药现代研究中心