新型鹅星状病毒荧光定量PCR方法的建立及应用

作者：马水锋; 徐梦璐; 吴少鹏; 邵红霞; 钱琨; 万志敏; 叶建强; 秦爱建^*

来源：中国家禽, 2022, 44(02): 36-42.

DOI：10.16372/j.issn.1004-6364.2022.02.006

• 新型鹅星状病毒
• 荧光定量PCR
• 特异性
• 灵敏度
• 临床诊断

为建立一种准确快速检测新型鹅星状病毒（Goose astrovirus,GAstV）的方法，研究以GAstV毒株JS20为模板，根据GAstV的ORF2基因序列设计特异性引物，在构建重组质粒pGEMT-GAstV的基础上，建立了检测GAstV的SYBR GreenⅠ实时荧光定量PCR(qRT-PCR)方法。结果显示：阳性对照重组质粒pGEMT-GAstV在1.087×101～1.087×108拷贝/μL浓度之间与qRT-PCR的Ct值呈现良好的线性关系；该qRT-PCR对所检测的鸡星状病毒（cASTV）、禽腺病毒（FAdV）、小鹅瘟病毒（GPV）以及鸭坦布苏病毒（DTMUV）均无交叉反应；检测灵敏度为1.087×101拷贝/μL，组内和组间变异系数均小于1.6%。利用该q RT-PCR方法对在鹅胚及LMH细胞上繁殖不同代次的JS20病毒载量进行检测发现，JS20在鹅胚上的扩增效率更高，病毒载量可达108～109拷贝/mL。对江苏不同地区26份临床样品进行检测发现，该q RT-PCR方法的阳性检出率为73.08%，而普通PCR方法阳性检出率仅为42.30%。结果表明建立的新型GAstV qRT-PCR具有很好的特异性及灵敏度，且在新型GAstV定量分析及临床样品检测诊断中展示了良好的应用前景。

• 单位
  扬州大学