绵羊成纤维细胞OAR-L1高效转染方法的探索

作者：吴飞; 吴杰; 陈学秋; 周静茹; 张惠; 黄艳; 时恒枝; 杨怡; 马光旭; 杜爱芳^*

来源：浙江大学学报(农业与生命科学版), 2022, 48(01): 96-105.

DOI：10.3785/j.issn.1008-9209.2021.01.192

• 成纤维细胞OAR-L1
• 转染方法
• 慢病毒
• 绵羊

为了在绵羊肺成纤维细胞OAR-L1中高效表达外源蛋白，探索适合该细胞的转染方法，本研究比较了聚乙烯亚胺(polyethyleneimine, PEI)、脂质体2000转染试剂(LipofectamineTM2000 transfection reagent, Lipo 2000)、成纤维细胞转染试剂盒(CytofectTMfibroblast transfection kit, CF2)以及慢病毒介导的细胞转染方法在OAR-L1细胞中表达外源蛋白的效果。结果显示：以pLentiCMV-EGFP-Puro或pLentiCMV-mCherry-Puro荧光质粒转染OAR-L1细胞时，细胞密度和转染试剂用量均可影响PEI、Lipo 2000和CF2介导的细胞转染效率，且三者最佳转染效率均不超过30%，而慢病毒介导的细胞侵染不受细胞密度和病毒液用量的限制，获得的荧光细胞数目也显著高于前三者。包装好的病毒液可以在4或-80℃条件下至少保存15 d而侵染效果不受影响。在OAR-L1细胞中共表达2种外源蛋白时，包装获得的2种慢病毒液等比例混合后再侵染的方式能获得更高的共转率。综上所述，慢病毒侵染是一种能够实现在OAR-L1细胞中高效表达外源蛋白的细胞转染方式，本研究结果为其他难转染细胞系转染方式的选择提供了一定的参考。

• 单位
  浙江大学; 动物科学学院