禽传染性支气管炎病毒S2蛋白单克隆抗体的制备及其抗原表位的鉴定

作者：李忠斐; 周建卫; 张焕东; 彭莉; 颜焰; 周继勇; 廖敏^*

来源：中国预防兽医学报, 2023, 45(09): 942-950.

• 禽传染性支气管炎病毒
• S2蛋白
• 单克隆抗体
• 抗原表位

为制备禽传染性支气管炎病毒(IBV) S2蛋白的单克隆抗体(MAb)，本研究通过原核表达系统表达并纯化重组S2蛋白，将其免疫BALB/c小鼠并通过间接ELISA方法筛选到4株能够稳定分泌S2蛋白MAb的杂交瘤细胞株，分别命名为1A7、4F12、4A7、4D1。亚类鉴定结果显示4株MAb的重链均为Ig G1，轻链均为κ。采用间接ELISA法检测上清及腹水效价，结果显示MAb细胞上清效价均不低于1∶12 800，腹水效价均不低于1∶51 200。采用western blot检测制备的S2蛋白MAb与IBV感染鸡胚尿囊液后天然表达的S2蛋白的反应原性；采用间接免疫荧光试验(IFA)检测IBV感染非洲绿猴肾细胞(Vero)后天然表达的S2蛋白的反应原性。Western blot结果显示，感染IBV的鸡胚尿囊液中出现了90 ku左右的特异性条带；IFA结果显示，感染IBV的Vero细胞中出现绿色荧光。以上结果表明，制备的S2蛋白MAb能够与天然表达的S2蛋白反应，反应原性较强。利用间接ELISA检测MAb与S2蛋白的亲和力，结果显示4株MAb对S2蛋白均有良好的亲和力。利用一系列表达部分重叠的重组S2片段并经western blot鉴定4株MAb识别的抗原表位，结果显示，1A7、4F12、4A7 MAb识别的抗原表位是69VQINCLQYVCGSSLECRKLFQQ90,4D1MAb识别的抗原表位是175YKKCTAGPLGTLKDLI190。采用IFA检测MAb的中和活性，结果显示，4株MAb均不具有中和活性。通过western blot检测MAb的反应谱，结果显示，MAb均能够与所选不同基因型(GI-1、GI-7、GI-13、GI-19、GI-22、GI-23) IBV发生特异性反应，表明制备的MAb反应谱较广。本研究为进一步探究IBV S2蛋白的功能及病毒致病机制奠定了基础。

• 单位
  浙江大学