Tamdy病毒糖蛋白基因的重组表达及抗体制备

作者：刘利平; 沈姝; 刘希佳; 张敏; 王岚; 何明宇; 孙素荣; 张渝疆^*; 丁军涛^*

来源：病毒学报, 2023, 39(01): 13-20.

DOI：10.13242/j.cnki.bingduxuebao.004259

• Tamdy病毒
• 糖蛋白
• 原核表达
• 真核表达
• 蛋白纯化
• 多克隆抗体

原核表达Tamdy病毒（Tamdy virus,TAMV）糖蛋白Gn和Gc，分别制备兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体。利用RT-PCR扩增Gn和Gc基因片段，分别构建原核表达质粒pET-28a-Gn和pET-32a-Gc，并在E.coli BL21(DE3)中诱导表达，镍柱亲和层析纯化融合蛋白Gn和Gc之后，以皮下注射方式分别免疫新西兰兔，制备兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体。经Western Blotting和间接免疫荧光（IFA）鉴定多克隆抗体抗原识别能力，ELISA法测定抗体效价。结果显示，pET-28a-Gn、pET-32a-Gc原核表达质粒构建正确，融合蛋白Gn和Gc大小分别约为45 kD、74 kD，制备的兔抗融合蛋白Gn和Gc多克隆抗体能够分别识别原核表达的融合蛋白Gn和Gc和真核表达产物，效价分别为1∶409 600、1∶204 800。制备的多克隆抗体效价高，能够特异性识别原核系统和真核系统表达的TAMV糖蛋白，为TAMV的流行学分析提供基础。

• 单位
  病毒学国家重点实验室; 中国科学院武汉病毒研究所; 新疆维吾尔自治区疾病预防控制中心