牛妊娠相关糖蛋白1(bPAG1)的真核表达及纯化

作者：刘长彬; 卢春霞^*; 杨华; 张云生; 石国庆^*

来源：西南农业学报, 2019, 32(08): 1944-1949.

DOI：10.16213/j.cnki.scjas.2019.8.040

• 牛妊娠相关糖蛋白
• 重组蛋白
• 真核表达
• PCDNA3.1(-)

[目的]本研究旨在构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组表达载体,并在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞细胞中转染表达。[方法]通过基因优化和PCR法扩增得到bPAG1的全基因序列,经T4连接酶将载体PCDNA3.1(-)与酶切bPAG1片段连接,构建PCDNA3.1(-)-bPAG1重组载体后转染到CHO细胞,经SDS-PAGE和Western Blot检测重组牛妊娠相关糖蛋白1(rbPAG1)的表达效果。[结果]PCR扩增得到1218 bp的bPAG1基因片段,构建的重组质粒PCDNA3.1(-)-bPAG1经双酶切获得约5400和1218 bp的2条片段,与预期相符;对重组载体测序,与优化后的基因序列完全一致;SDS-PAGE和Western Blot鉴定显示,获得相对分子质量约为62 kDa的bPAG1重组蛋白,通过Ni柱亲和层析纯化后,rbPAG1纯度可达88%。[结论]本研究为bPAG抗体的制备和奶牛早孕诊断技术的研发奠定了基础。

• 单位
  生物工程学院; 石河子大学; 长江师范学院; 新疆农垦科学院; 动物科技学院