重组人前列腺特异性抗原的原核表达、纯化与鉴定

作者：王增军; 张炜; 吴宏飞; 眭元庚

来源：中华男科学杂志, 2007, 13(12): 1080-1083.

DOI：10.3969/j.issn.1009-3591.2007.12.006

• 前列腺特异性抗原
• 表达
• 纯化
• 原核鉴定
• 重组技术
• 分子克隆

目的:用分子克隆技术体外制备人前列腺特异性抗原(PSA)重组蛋白,并对其活性进行鉴定.方法:用分子克隆技术从前列腺癌cDNA文库中扩增PSA cDNA,再将cDNA和准备插入的质粒载体PET-12α分别用限制性内切酶Nde Ⅰ和BamH Ⅰ消化,然后用T4连接酶将两者连接,序列正确的阳性克隆转染BL21(DE3)大肠埃希菌,诱导表达重组人PSA蛋白,从细菌包涵体中纯化PSA蛋白,再用小剂量胰岛素激活PSA活性,观察活化的PSA是否分解其变色底物S-2586和天然底物精囊蛋白Semenogelin(Sg).结果:利用原核表达技术得到了重组人PSA,在胰岛素作用下PSA被激活,活性PSA水解其天然底物Sg和变色底物S-2586.结论:用基因克隆方法体外获得的重组人PSA蛋白可表现与天然PSA同样的丝氨酸蛋白酶活性和功能.

• 单位
  南京医科大学第一附属医院