肿瘤坏死因子-α对大鼠肺泡上皮细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响

作者：石国翠; 马申懋; 马希刚^*

来源：中华急诊医学杂志, 2019, (09).

• 肿瘤坏死因子-α
• 紧密连接蛋白
• 急性肺损伤
• 肺上皮屏障
• 凋亡

目的 探究肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞(alveolar epithelial type Ⅱ cells, AEC-Ⅱ)及紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的影响。方法 体外培养大鼠AEC-Ⅱ细胞,将细胞分为正常对照组,TNF-α24 h、48 h、72 h组。对照组用含胎牛血清的DME F12培养液培养细胞,TNF-α各组用TNF-α(10 ng/mL)分别刺激细胞24、48、72 h。共培养结束后采用透射电镜鉴定并观察细胞超微结构的变化。MTT法测定细胞增殖抑制情况。流式细胞仪测定细胞早期凋亡率。免疫荧光法观察各组细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达分布,实时荧光定量PCR法测定各组细胞ZO-1、Claudin-4 mRNA水平的变化,Western blot测定紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4表达的变化。多组样本间均数比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。方差不齐时则用秩转换的非参数检验。以P<0.05为差异有统计学意义。结果 透射电镜下可见对照组大鼠AEC-Ⅱ细胞内含有大小不等的特征性板层小体,TNF-α各组板层小体逐渐排空,视野下可见凋亡细胞。TNF-α各组细胞的早期凋亡率及增殖抑制率均较对照组降低(均P<0.05)。共聚焦显微镜下观察到ZO-1沿细胞膜呈线状分布,Claudin-4沿细胞膜呈散点状分布,TNF-α各组ZO-1的荧光强度减弱,连续性被破坏,线性结构断裂,甚至消失。Claudin-4的荧光强度减弱,密度降低。TNF-α24 h组ZO-1的转录及表达均低于对照组,但差异无统计学意义(P>0.05)。TNF-α48 h及72 h组细胞ZO-1的mRNA(0.28±0.06；0.13±0.07)与对照组比较明显降低(P<0.01),且两组蛋白水平(0.44±0.09；0.2±0.01)均低于对照组(0.69±0.12)。与对照组比较,TNF-α各组细胞Claudin-4转录(24 h：0.16±0.03,48 h：0.04±0.01,72 h：0.01±0.00vs 1.00±0.00)及表达水平(24 h：0.49±0.08,48 h：0.34±0.05,72 h：0.04±0.01vs 0.96±0.13)明显降低(均P<0.05),且随着时间延长呈递减趋势。结论 TNF-α通过损伤大鼠AEC-Ⅱ和下调细胞紧密连接蛋白ZO-1、Claudin-4的表达分布,损伤肺上皮屏障。

• 单位
  沧州市人民医院; 宁夏医科大学总医院