miR-339-5p通过抑制NUDT5增强肺癌A549细胞的放射敏感性

作者：王柏霖; 云天洋; 王发鹏; 林吉兴; 李一民; 梁朝阳^*

来源：中国肿瘤生物治疗杂志, 2020, 27(08): 867-873.

DOI：10.3872/j.issn.1007-385x.2020.08.005

• 肺癌
• miR-339-5p
• Nudix结构水解酶5
• 放射敏感性

目的:探讨miR-339-5p通过调控Nudix结构水解酶5(Nudix hydrolase 5,NUDT5)的表达对肺癌A549细胞放射敏感性的影响。方法:体外低浓度梯度递增结合大剂量间断冲击方法诱导产生耐X射线的肺癌A549细胞株(RA549),qPCR检测miR-339-5p在人正常肺上皮细胞(BEAS-2B)、肺癌细胞系(A549、L78、H1299、H460和RA549细胞)中的表达水平。根据对RA549细胞的处理,实验分为NC组、5 Gy组(5 Gy X射线处理RA549细胞)、5 Gy+miR-339-5p mimic组、5 Gy+si-NUDT5组和5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inbibitor组,CCK-8法、Annexin V-FITC/PI双染流式术和WB分别检测各组细胞增殖、凋亡以及NUDT5、γ-H2AX和H2AX蛋白表达的变化,双荧光素酶报告基因系统验证miR-339-5p和NUDT5的靶向关系。结果:miR-339-5p在各肺癌细胞系中表达显著低于BEAS-2B细胞(均P<0.05),其中RA549细胞表达水平最低。验证显示NUDT5是miR-339-5p的靶基因。与NC组相比,5 Gy组RA549细胞增殖活力和NUDT5表达显著降低(均P<0.01),凋亡率显著升高(P<0.01);与5 Gy组相比,5 Gy+miR-339-5p mimic组RA549细胞的增殖活力显著降低(P<0.05)、凋亡率[(12.97±1.48)%vs(5.21±0.62)%,P<0.01]和γ-H2AX的表达水平(P<0.05)显著升高,5 Gy+si-NUDT5组RA549细胞中NUDT5的表达水平(P<0.01)和细胞增殖活力(P<0.01)均显著降低,凋亡率[(11.21±1.06)%vs(5.54±0.44)%,P<0.01]和γ-H2AX表达水平(P<0.01)均显著升高,而5 Gy+si-NUDT5+miR-339-5p inhibitor组细胞中上述指标均回复至5 Gy组水平。结论:过表达miR-339-5p通过靶向下调NUDT5表达肺癌A549细胞的放射敏感性。

• 单位
  招远市人民医院; 解放军总医院