脂多糖抑制MCT1表达引起乳酸清除障碍促进肺泡上皮细胞上皮-间质转化

作者：冯金华; 胡钺; 梅舒雅; 汤日; 周洋; 邢顺鹏; 皋源; 何征宇; 徐侨翌^*

来源：国际麻醉学与复苏杂志, 2023, 44(01): 28-34.

DOI：10.3760/cma.j.cn321761-20220916-00710

• 肺纤维化
• 脂多糖
• 乳酸
• 上皮-间质转化
• 单羧酸转运蛋白-1

目的通过研究脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)与单羧酸转运蛋白-1(monocarboxylate transporter 1, MCT1)表达的关系及对肺泡上皮细胞上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transformation, EMT)的影响, 探究LPS诱导的肺纤维化过程中肺泡上皮细胞EMT的潜在机制。方法① 24只C57BL/6小鼠采用随机数字表法分为对照组(Con1组)和脂多糖刺激组(LPS1组), 每组12只。LPS1组小鼠连续3 d腹腔注射LPS 5 mg·kg?1·d?1, Con1组小鼠注射等体积生理盐水, 造模7 d后取材。Western blot法和免疫荧光检测肺组织MCT1以及EMT相关标志蛋白[E-钙黏蛋白(E-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)]的表达情况, ELISA法检测血清中乳酸含量, 马松(Masson)染色评估肺组织纤维化程度。②将MLE-12细胞按照随机数字表法分为4组(每组3个孔):PBS对照组(Con2组)、乳酸组(Lac2组)、脂多糖组(LPS2组)及乳酸+脂多糖组(Lac+LPS2组), 分别用PBS、10 mmol/L乳酸、1 mg/L LPS和10 mmol/L乳酸+1 mg/L LPS刺激48 h。使用Western blot法及免疫荧光检测各组细胞MCT1、E-cadherin、Vimentin水平, 同时检测各组细胞上清液pH值。结果①与Con1组比较, LPS1组小鼠肺组织MCT1蛋白水平降低(P< 0.05), E-cadherin水平降低(P<0.05), Vimentin水平升高(P<0.05);肺组织E-cadherin荧光强度降低, Vimentin荧光强度增强, MCT1荧光强度降低;肺组织出现纤维化表现;同时伴有血清乳酸含量升高(P<0.05)。②与Con2组比较, Lac2组MCT1蛋白水平明显升高(P<0.05), E-cadherin、Vimentin水平及pH值差异无统计学意义(P>0.05);LPS2组与Lac+LPS2组MCT1蛋白水平明显降低(P<0.05), E-cadherin水平降低(P<0.05), Vimentin水平升高(P<0.05), pH值降低(P<0.05)。与Lac2组比较, Lac+LPS2组细胞MCT1蛋白水平和E-cadherin水平明显降低(P<0.05), Vimentin水平明显升高(P<0.05), pH值降低(P<0.05)。与Con2组比较, Lac2组MCT1荧光强度增强, E-cadherin、Vimentin荧光强度无明显变化;LPS2组与Lac+LPS2组MCT1和E-cadherin荧光强度减弱, Vimentin荧光强度增强。与Lac2组比较, Lac+LPS2组MCT1、E-cadherin荧光强度明显减弱, Vimentin荧光强度明显增强。结论在LPS诱导的肺纤维化过程中, LPS可抑制小鼠肺泡上皮细胞MCT1的表达, 导致乳酸清除障碍和细胞外液酸化, 从而促进EMT和组织纤维化过程。

• 单位
  上海交通大学医学院附属仁济医院