一株针对人EGFR的单链抗体克隆与哺乳细胞表达

作者：高鑫; 韦攀健; 闫卓红; 易玲; 王小珏; 杨斌; 张洪涛

来源：中国生物工程杂志, 2018, 38(05): 73-78.

DOI：10.13523/j.cb.20180510

• 表皮生长因子受体
• 单链抗体
• 哺乳细胞表达

目的:制备特异性抗人表皮生长因子受体(EGFR)的单链抗体(sc Fv),鉴定其生物学活性,为进一步研究基于单链抗体的免疫治疗奠定基础。方法:从分泌抗人EGFR单克隆抗体的杂交瘤细胞系提取总RNA,利用5’RACE技术扩增轻链和重链可变区(VL、VH)基因,构建具有VL、VH基因的单链抗体基因,并将构建的单链抗体基因克隆到真核细胞表达载体pc DNA3.1中进行表达和鉴定。ELISA鉴定单链抗体对抗原的特异性;Fortebio检测抗原抗体间的亲和力,流式细胞术检测单链抗体结合肺癌细胞系天然EGFR的功能活性。结果:获得唯一的轻重链可变区序列VL、VH,成功构建EGFR-sc Fv,特异性与天然EGFR蛋白结合,亲和力达3.22×10-9mol/L。结论:成功构建了抗人EGFR单链抗体,为肺癌免疫导向治疗研究奠定了基础。

• 单位
  北京市结核病胸部肿瘤研究所; 中心实验室; 首都医科大学附属北京胸科医院