重组人β干扰素在DHFR~--CHO细胞中的高效表达

作者：史艳秋; 陈畅; 顾黎; 邹思湘; 宋静; 王鹏

来源：中国生化药物杂志, 2006, (03): 129-133.

• 中国仓鼠卵巢细胞
• β干扰素
• 真核表达
• 抗增殖活性 CHO
• interferon-beta
• eukaryotic expression
• anti-proliferation activity

目的由二氢叶酸还原酶缺陷型的中国仓鼠卵巢(DHFR--CHO)细胞高效表达重组人β干扰素(rhIFN-β),比较来源于E.coli、Yeast和CHO细胞的IFN-β抗增殖活性。方法采用PCR技术,从pLG104R载体中扩增目的基因,经XhoⅠ和SmaⅠ双酶切后克隆到真核表达载体pCI-dhfr中,采用阳离子脂质体介导方法,将构建的表达载体转染到CHO细胞中。通过MTX的加压筛选,以病毒诱导的细胞病变抑制(CPEI)法进行活性定量检测,获得稳定、高效表达rhIFN-β的CHO细胞株,并扩大培养。分离纯化后,定量并鉴定表达产物。采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法比较E.coli、Yeast和CHO细...

• 单位
  微生物技术国家重点实验室; 南京农业大学; 山东大学