人周期素依赖性激酶10真核表达质粒的构建及鉴定

作者：游颜杰; 苑艺; 李文梅; 刘佳佳; 张晓辉

来源：中国生物制品学杂志, 2015, 28(01): 43-45.

DOI：10.13200/j.cnki.cjb.000724

• 人周期素依赖性激酶10
• 真核细胞
• 基因表达
• 鼻咽癌

目的构建人周期素依赖性激酶10(cyclin-dependent kinase 10,CDK10)真核表达质粒,并进行鉴定。方法采用RT-PCR法从人鼻咽癌细胞株HNE1中扩增CDK10基因全长编码区序列,克隆入真核表达载体pc DNA3.1(+)中,构建重组表达质粒pc DNA-CDK10,转染人鼻咽癌细胞株CNE-2,采用Western blot法检测转染细胞中CDK10蛋白的表达水平。结果重组真核表达质粒pc DNA-CDK10经双酶切及测序证实构建正确;经800μg/ml的G418筛选2周后,获得过表达CDK10的稳定转染细胞系CDK10c1和CDK10c2;与空载体转染对照组相比,CDK10c1和CDK10c2细胞中CDK10蛋白的表达量均显著升高(P均<0.05)。结论成功构建了人CDK10真核表达质粒。

• 单位
  河南科技大学第一附属医院; 漯河医学高等专科学校