抑制自噬对艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡的影响

作者：朱卫东; 余枭; 李霞; 余灿; 朱红伟; 韩铎; 黄珲; 李志强^*

来源：中华肝胆外科杂志, 2018, 24(12): 848-852.

• 艾塞那肽
• 胰腺腺泡细胞
• 凋亡
• 自噬抑制剂,3-MA

目的探讨艾塞那肽对AR42J细胞株的损伤及其可能机制。方法 1、5、10pmol/L艾塞那肽处理AR42J细胞株24、48、72、96、120 h,噻唑蓝(MTT)法检测细胞活力,筛选最佳浓度和时间作为后续实验条件。设置空白对照组(NC)、艾塞那肽组(Ex-4)和Ex-4+z-VAD-fmk组,检测艾塞那肽是否可直接导致AR42J细胞凋亡;设置NC组、Ex-4组、3-MA组和Ex-4+3-MA组,探究3-MA能否抑制艾塞那肽诱导的AR42J细胞凋亡。3-MA为自噬抑制剂,z-VAD-fmk为凋亡抑制剂。细胞活力检测采用MTT法。流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blot检测caspase-3等凋亡相关蛋白以及微管相关蛋白轻链3(LC3)自噬相关蛋白表达。结果以10 pmol/L艾塞那肽作用72 h为后续实验条件。z-VAD-fmk预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,两组细胞活力为(49.4±3.0)%比(81.2±3.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ex-4组细胞凋亡率(28.2±1.4)%,高于NC组的(3.6±0.8)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot也显示caspase-3表达明显上调,而z-VAD-fmk预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的细胞凋亡和caspase-3表达增加。3-MA预处理可明显抑制艾塞那肽的细胞毒性,处理72 h两组细胞活力为(49.8±2.5)%比(79.1±2.3)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Ex-4组细胞凋亡率为(29.2±3.2)%,高于Ex-4+3-MA组的(14.5±2.1)%,差异有统计学意义(P<0.05)。Western blot结果表明艾塞那肽可上调LC3B-Ⅱ、p62和caspase-3的表达,而3-MA预处理则可明显抑制艾塞那肽引起的LC3B-Ⅱ和caspase-3上调,但p62的表达却进一步上调。结论艾塞那肽可诱导AR42J细胞凋亡,3-MA可通过抑制自噬而抑制艾塞那肽诱导的凋亡。使用3-MA可作为减轻艾塞那肽对胰腺腺泡细胞毒性的一种潜在方法。

• 单位
  中南大学湘雅三医院; 岳阳市二人民医院