bmi-1shRNA逆转录病毒表达载体的构建及稳定转染LoVo细胞系的建立

作者：汪云霞; 魏亚明; 王晓华; 朱晓莹; 黄颖烽

来源：肿瘤防治研究, 2010, (03): 269-273.

• bmi-1基因
• RNA干扰
• 结肠癌细胞
• 转染
• 短发夹RNA bmi-1
• RNA interference
• Colorectal cancer
• Transfection
• shRNA

目的构建针对原癌基因bmi-1的shRNA逆转录病毒表达载体,建立稳定转染的LoVo细胞系,探讨稳定转染bmi-1shRNA对大肠癌细胞LoVo靶基因表达的影响,为下一步应用RNAi技术治疗打下基础。方法设计合成靶向bmi-1基因编码短发夹RNA的两条寡核苷酸序列,另设计无义对照序列,构建重组载体pSIREN-bmi-1及pSIREN-bmi-1-C,载体经脂质体2000介导转染LoVo细胞,通过嘌呤霉素筛选,建立稳定转染的LoVo细胞系,显微镜观察、MTT检测、荧光定量PCR、Western blot检测bmi-1表达受抑后对细胞的增殖影响。结果成功构建了针对bmi-1基因的shRNA表达载...

• 单位
  广州医科大学; 广州市第一人民医院