加味四妙方通过调控蛋白多糖降解治疗大鼠痛风性关节炎的机制研究

作者：秦冬儿; 颜星宇; 梁涛; 唐璠; 牛玉珍; 朱方方; 杨凡; 时乐^*

来源：中医药信息, 2023, 40(06): 1-22.

DOI：10.19656/j.cnki.1002-2406.20230601

• 蛋白多糖
• 痛风性关节炎
• 基质金属蛋白酶
• 软骨细胞
• 加味四妙方
• 单钠尿酸盐

目的：基于蛋白多糖降解探讨加味四妙方对单钠尿酸盐（MSU）诱导的大鼠痛风性关节炎（GA的作用及其作用机制。方法：将6只SD大鼠随机分为空白组和模型组，每组3只，模型组向关节腔内注射0.1 mL MSU溶液（100 mg/mL）建立GA模型，对照组注射等体积生理盐水。24 h后对两组大鼠的滑膜组织进行转录组测序，筛选出差异表达基因。体外培养家兔膝关节软骨细胞，甲苯胺蓝染色、RT-PCR法检测不同代数软骨细胞中蛋白多糖（PGs）的表达。采用Western blot与qRT-PCR法检测不同浓度MSU(200、500、1 000μmol/L)处理后MMP-3的蛋白及mRNA表达。将33只SD大鼠随机分为空白组、模型组、给药组，每组11只。膝关节注射0.1 mL MSU溶液（100 mg/mL）制备大鼠痛风性关节炎模型，免疫组化检测滑膜组织中MMP-3的表达，番红固绿染色法检测大鼠关节软骨细胞蛋白多糖的表达。结果：MMP-3是显著上调的差异表达基因，与Jak/STAT信号通路、TGF-β信号通路、趋化因子信号通路、IL-17信号通路等密切相关。体外验证发现，与空白组比较，经250、500、1 000μmol/L MSU刺激24 h后，MMP-3蛋白表达水平明显升高（P <0.05）；与空白组比较，MMP-3 mRNA表达水平经250μmol/L MSU刺激后明显升高（P <0.01），经500、1 000μmol/L MSU刺激后其表达显著升高（P <0.001）。与空白组比较，经250、500μmol/L MSU刺激后，各组软骨细胞蛋白多糖表达均显著降低（P <0.05）；与250μmol/L MSU组比较，10%和20%加味四妙方含药血清（MSM）组均能有效逆转上述结果（P <0.001）。与500μmol/L MSU组比较，20%MSM能够有效上调蛋白多糖的表达（P <0.05）。与空白组比较，模型组软骨细胞蛋白多糖mRNA表达显著降低（P <0.001）；与模型组相比，10%MSM与20%MSM均能有效增加其mRNA表达（P <0.001,P <0.05）。与空白组比较，模型组大鼠膝关节肿胀明显（P <0.05,P <0.01）；与模型组比较，各给药组能明显抑制其关节肿胀（P <0.05,P <0.01）。与空白组比较，模型组MMP-3表达增加且关节软骨表层蛋白多糖丢失；与模型组相比，各给药组对上述现象均有明显改善作用。结论：加味四妙方通过抑制MMP-3生成调控蛋白多糖降解从而治疗痛风性关节炎。

• 单位
  南京中医药大学