罗汉果GAPDH基因的克隆及其在基因表达分析中的应用

作者：余汇; 蒋向军; 覃宇燕; 王骏; 韩艺璇; 吴琼

来源：时珍国医国药, 2014, 25(02): 495-498.

• 罗汉果
• 甘油酸-3-磷酸脱氢酶
• 内参基因
• 实时荧光定量PCR

目的克隆罗汉果甘油酸-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH,EC 1.2.1.12)基因,分析其在基因表达定量研究中其作为内部参照基因的可行性。方法采用同源克隆和cDNA末端快速克隆技术,以罗汉果cDNA为模板扩增GAPDH基因的保守区片段。结果获得了罗汉果GAPDH保守区序列cDNA,命名为SgGAPDH(GenBank注册号:KC410810),序列长度为627 bp,编码209个氨基酸的多肽。系统发育分析表明,SgGAPDH属于植物甘油酸-3-磷酸脱氢酶家族。半定量PCR分析表明罗汉果GAPDH基因在不同组织中表达很稳定。以其作为内部参照基因,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)研究了异戊烯基焦磷酸异构酶(Isopentenyl-diphosphate delta isomerase)的组织表达规律。结果显示SgGAPDH具有良好的扩增效果和重现性。结论首次克隆了罗汉果GAPDH基因,明确了该序列在基因表达分析中的内参照作用,为罗汉果甜苷生物合成基因的研究提供了条件。

• 单位
  桂林医学院; 兰州城市学院; 桂林亦元生现代生物技术有限公司