摘要
目的通过利用神经纤毛蛋白1(NRP1)不同表达水平的肺上皮细胞模型, 检测电离辐射诱导上皮-间充质转化(EMT)标志物及相关转录因子表达变化, 探讨NRP1对辐射诱导肺上皮细胞EMT发生中的作用。方法对人肺Ⅱ型上皮细胞(A549)构建NRP1过表达(NRP1high-A549)和NRP1敲低(NRP1low-A549)细胞模型, 同时对小鼠正常肺上皮细胞(MLE-12)构建siNRP1-MLE-12细胞模型并进行验证。对NRP1high-A549、NRP1low-A549和siNRP1-MLE-12细胞模型分别进行单次10 Gy X射线照射, 于照射后0、12、24和48 h提取总蛋白和总RNA。利用Western blot法和q-PCR法检测各组细胞模型中EMT标志物(β-catenin、N-cadherin和Vimentin)及相关转录因子(Twist和ZEB1)的变化。结果野生型A549和MLE-12细胞照射后NRP1 mRNA和蛋白表达显著升高, 间充质标志物(Vimentin和N-cadherin)显著升高(A549:t=2.917、7.361,P<0.01;MLE-12:t=9.652、31.357,P<0.01), ZEB1和Twist转录因子表达显著升高(A549:t=4.852、9.278,P<0.01;MLE-12:t=30.985、17.266,P<0.01)。NRP1low-A549和siNRP1-MLE-12组受照后Vimentin和N-cadherin表达显著下降(NRP1low-A549:t=10.077、15.707,P<0.01;siNRP1-MLE-12:t=5.745,P<0.01), 上皮标志物(β-catenin)蛋白表达显著升高;而NRP1high-A549组照射后N-cadherin和Vimentin显著升高(t=16.055、5.560,P<0.01), 而β-catenin显著下降。检测NRP1low-A549组Twist转录因子在照射后显著下降(t=3.987,P<0.01), 而NRP1high-A549组ZEB1和Twist转录因子照射后呈时间依赖性升高(t=11.289、2.903,P<0.01);siNRP1-MLE-12细胞模型照射后ZEB1转录因子显著下降(t=13.449,P<0.01), siNRP1-MLE-12组ZEB1和Twist蛋白表达均低于对照组, 呈时间依赖性下降。结论 NRP1可促进辐射诱导人和小鼠上皮细胞的EMT发生, 而这种促进作用可能通过上调转录因子ZEB1和Twist的表达。
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单位公共卫生学院; 吉林大学