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摘要
由黑顶柄锈菌（Puccinia melanocephala Sydow）引起的甘蔗褐锈病是甘蔗生产中较为严重的叶部病害之一。建立该病原菌的高效检测与特异性鉴定技术体系，对于该病害的监测、预警以及及时采取必要的防治措施均具有重要的意义。为此，本文基于甘蔗褐锈病菌ITS序列保守区域位点设计了该病原菌的单管巢式PCR引物对，对外内引物退火温度、外内引物浓度比两个方面进行筛选与优化，并对所建立的单管巢式PCR检测体系的特异性和灵敏度进行了分析。结果表明，所设计的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR外引物PmF1/R1、内引物PmF2/R2的退火温度分别为63℃与52℃，以及外引物PmF1/R1与内引物PmF2/R2最佳终浓度比例为0.5 pmol/L∶0.5μmol/L时，单管巢氏PCR检测体系较佳。所建立的甘蔗褐锈病菌单管巢式PCR检测体系仅从含有甘蔗褐锈病菌DNA模板中检测出预期大小的特异性条带，而从含甘蔗黄锈病菌、咖啡驼孢锈菌、鸡蛋花鞘锈菌、葡萄层锈病菌、甘蔗黑穗病菌、橡胶炭疽病菌、咖啡褐斑病菌、稻瘟病菌、剑麻茎腐病菌的DNA中并未扩增出任何条带。通过模板梯度稀释法证实，所建立的单管巢氏PCR检测体系的最低检测限为10 fg/μL，是普通PCR灵敏度的1 000倍。田间19份疑似病样单管巢式PCR检测结果，有18份样品DNA中含有甘蔗褐锈病菌。本检测方法可以用于甘蔗褐锈病病原菌的快速诊断及其病害监测，为该病害预测、预报提供技术支持。
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