内毒素刺激的人肺微血管内皮细胞血管紧张素Ⅱ受体1放射受体分析法的建立

作者：李红鹏; 邱海波; 刘玲; 王连; 丁惠民; 杨毅; 周韶霞; 许德义

来源：中华医学会第二届全国重症医学大会.

• 内毒素
• 肺部炎症反应
• 微血管内皮细胞
• 血管紧张素Ⅱ
• 放射受体分析法

目的：建立内毒素刺激下人肺微血管内皮细胞(HPMEC)血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)-型受体(ATR1)与其配体AngⅡ结合的放射受体分析法(RRA)。 方法：体外培养的HPMEC接种于24孔板，当细胞达到80～90％融合度后，饥饿24h用浓度为100ng/ml的LPS刺激8小时，用0.025、0.05、0.1、0.2、0.4、0.8、1.6、2.Ofmol八个不同剂量的放射性配体125I—Angu(TL表示其放射性)在板孔中与ATRl结合(存在或不存在5μgAngⅡ)，然后γ计数仪计数，测定ATR1的总结合(TB)与非特异性结合(NSB)，TL减去TB得游离放射配体(F)，TB减去NSB得ATR1的特异性结合(B)。由TB与TL作图得ATR1饱和曲线；由B/F与B作图制作Scatchart曲线。 结果:随放射性配体125I—AngⅡ加入量的增加，NSB也相应逐渐增加，且由直线相关与回归分析得到NSB与加入125I-AngⅡ剂量呈直线关系(R1=0.9929)；Scatchan作图得B/F与B也呈直线关系，其相关系数R2=0.9514，HPMEC上仅存在单一亲和力的AngⅡ受体，反应亲和力的Kd值为109pmol/5×105细胞，从Scatchart曲线与X轴截距得到ATR1的最大结合位点Bmax为29pmol/5×105细胞：ATR1饱和曲线分为两段，前段斜率较大随125I-AngⅡ加入量的增加TB增加明显；后端曲线较为平坦TB随125I—AngⅡ的增加变化不明显，125I-AngⅡ在1600pmol/5×105细胞到2000pmol/5×105细胞之间TB的增加与NBS增加基本相当，能使ATR1饱和的125I-AngⅡ剂量为1600pmol/5×105细胞。 结论：建立的RRA方法能得到ATR1的Kd与Bmax两个基本参数，可用于LPS刺激下HPMEC的ATR1功能研究。

• 单位
  东南大学; 基础医学院; 东南大学附属中大医院