CPSITp7重组表达产物免疫原性检测及其在鹦鹉热嗜衣原体持续性感染中表达的研究

作者：贺庆芝; 曾怀才; 黎知青; 王川; 胡艳群; 陈芝喜; 吴移谋

来源：中华微生物学和免疫学杂志, 2014, 34(08): 604-608.

DOI：10.3760/cma.j.issn.0254-5101.2014.08.007

• 鹦鹉热嗜衣原体
• CPSITp7
• 克隆表达
• 免疫原性
• 持续性感染

目的构建鹦鹉热嗜衣原体(Chlamydophila psittaci,Cps)CPSITp7原核表达载体,表达并纯化CPSITp7,检测其免疫原性,观察其在持续性感染过程中的mRNA和蛋白动态表达情况。方法原核表达和纯化His-CPSITp7融合蛋白,免疫BALB/c小鼠制备多克隆抗体,ELISA分析HisCPSITp7蛋白的免疫原性。采用青霉素与Cps共同处理细胞来制备持续性感染模型,RT-PCR和Western blot检测CPSITp7在其持续性感染过程中的表达情况。结果成功构建了pET30a-CPSITp7原核表达载体,并表达和纯化较稳定的重组蛋白;该蛋白免疫小鼠40 d后,ELISA检测血清特异性抗体效价为1:1 000 000;RT-PCR和Western blot结果显示在Cps急性感染与持续性感染过程中CPSITp7 mRNA和蛋白表达水平均呈时间依赖性增加,感染后mRNA在36 h表达量达到高峰,之后急性感染呈时间依赖性下降,而持续性感染CPSITp7 mRNA高表达水平至少持续到60 h。结论成功克隆表达了His-CPSITp7,该蛋白具有较好的免疫原性;CPSITp7基因和蛋白在Cps持续性感染中呈高表达。

• 单位
  南华大学