高地芽孢杆菌FY1果胶酸裂解酶基因BaPel的克隆及表达分析

作者：赵合美; 朱原; 杨雪; 吴雷; 李思圆; 杨美英

来源：吉林农业大学学报, 2022, 1-7.

DOI：10.13327/j.jjlau.2022.1941

• 高地芽孢杆菌
• 果胶酸裂解酶
• 原核表达
• 蛋白纯化

本研究以高地芽孢杆菌FY1的基因组DNA作为模板，成功克隆果胶酸裂解酶基因BaPel。采用生物信息学对BaPel基因进行结构分析和功能预测。结果可知，果胶酸裂解酶基因BaPel全长1032 bp，编码343个氨基酸，有完整的多糖裂解酶6超家族结构域和Pec＿lyase＿C结构域，可将其归类为PL1家族。构建表达载体ΔpET-30a-BaPel 并转入大肠杆菌BL21中进行蛋白诱导表达及纯化。结果表明在16 ℃，IPTG浓度为0.5 mmol/L的条件下诱导16 h蛋白表达量最高，纯化后在38.5KDa处出现与预期大小一致的蛋白条带。酶活测定结果显示纯化后酶活力可达到235 U/mg，较粗酶提高1.4倍。

• 单位
  生命科学学院; 吉林农业大学