柑橘黄脉病毒一步法RT-PCR快速检测技术探究

作者：刘顺民; 杜丹超; 蒲占湑; 朱莉; 张利平; 吕佳; 黄振东; 陈国庆^*; 鹿连明^*

来源：浙江农业科学, 2023, 64(11): 2742-2748.

DOI：10.16178/j.issn.0528-9017.20230780

• 柑橘黄脉病毒
• 一步法RT-PCR
• 快速检测

本研究通过对柑橘黄脉病毒(citrus yellow vein clearing virus, CYVCV)的三基因盒基因、病毒外壳蛋白基因及23K基因序列分析并设计出7对引物，对引物特异性和灵敏度进行比较，筛选出能够应用于实验室一步法RT-PCR快速检测CYVCV的引物，由此建立起针对CYVCV一步法RT-PCR快速检测体系。结果表明：引物对TGB1-F/R能从柑橘总RNA稀释160 000倍(0.004 ng·μL-1)的稀释液中检测出CYVCV,利用该体系对607份田间随机样品进行检测，CYVCV的感染率为10.05%,说明该体系可靠稳定，适用于实验室里的大量检测；一步法RT-PCR获得CYVCV的TGB1、TGB2、TGB3、CP和23K的特异性片段，片段序列长度分别为678、327、183、978和669 bp,通过克隆和测序结果比对显示，各片段与已报道的CYVCV病毒序列具有较高的同源性，同源性均在99%以上。

• 单位
  浙江省柑橘研究所; 浙江省农业科学院