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摘要
以结核分枝杆菌H37Ra菌株基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增获得HspX基因，通过DNA无缝克隆技术将其克隆至pET28a质粒中，构建重组表达质粒pET28a-HspX。将pET28a-HspX转化至大肠埃希菌表达菌株BL21(DE3)，采用不同温度、IPTG浓度和时间诱导HspX蛋白表达。使用Ni-IDA亲和层析柱纯化目的HspX蛋白，透析去除咪唑，通过Western blot检测HspX抗原特异性。最终确定表达重组蛋白HspX的最佳诱导条件为：诱导温度37℃、IPTG浓度0.2 mmol/L、诱导时间8 h。结果表明，获得了高纯度和被特异性识别的可溶性Hsp X蛋白，为未来Hsp X蛋白用于结核病诊断试剂和疫苗奠定基础。
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