稳定表达乙型肝炎病毒X基因肝细胞株的构建

作者：谢斌辉; 王小农; 刘凤恩; 钟宝元; 徐道峰; 何晓; 彭宝岗

来源：山东医药, 2010, 50(10): 10-11.

• 肝细胞
• 乙型肝炎病毒X基因
• 真核表达载体
• 转基因细胞模型

目的构建稳定表达乙型肝炎病毒X基因(HBVx)的正常人肝细胞株。方法用PCR法扩增含EcoRⅠ和H indⅢ酶切位点的X基因序列,构建HBVx基因真核表达载体pcDNA3.1(+)-HBVx,转化大肠杆菌DH5α,筛选阳性克隆并对其进行双酶切和测序鉴定;用脂质体转染法将HBVx基因导入Chang细胞系,G418筛选,RT-PCR和W estern b lot鉴定。结果X基因亚克隆入pcDNA3.1(+),含有完整的X基因片段,转染后Chang细胞有HBVxmRNA表达,Chang/HBVx有HBVx蛋白的表达。结论构建了稳定表达HBVx基因的肝细胞株Chang/HBVx。

• 单位
  中山大学附属第一医院; 赣南医学院第一附属医院